一、核心檢測(cè)流程與操作規(guī)范  

樣品采集與前處理  

代表性采樣：從糧食、飼料、乳制品等不同部位采集300-500g樣品，粉碎至90%通過20目篩，混合均勻后密封保存于4℃環(huán)境，避免真菌過度生長(zhǎng)或毒素降解。  

提取與凈化：采用50%乙醇或乙腈水溶液振蕩提取3分鐘，離心后取上清液；通過固相萃取（SPE）、免疫親和層析（IAC）或QuEChERS法凈化，去除脂肪、蛋白質(zhì)等干擾物質(zhì)。例如，黃曲霉毒素B1檢測(cè)中，免疫親和柱可特異性捕獲毒素，提高純度。  

稀釋與復(fù)溶：凈化后樣品經(jīng)氮吹濃縮，用流動(dòng)相精確復(fù)溶至1mL，確保體積誤差≤0.05mL，避免結(jié)果偏差。  

真菌毒素檢測(cè)方法選擇與技術(shù)參數(shù)  

傳統(tǒng)方法：薄層色譜法（TLC）通過展開劑遷移分離毒素，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）利用抗原抗體反應(yīng)定量，但易受基質(zhì)干擾，靈敏度較低（檢測(cè)限約0.1μg/kg）。  

現(xiàn)代技術(shù)：  

全自動(dòng)檢測(cè)儀：集成樣品稱量、提取、分離、檢測(cè)全流程自動(dòng)化，每小時(shí)處理60個(gè)樣品，檢測(cè)限達(dá)0.01μg/kg（如黃曲霉毒素B1），支持6種毒素同步檢測(cè)，數(shù)據(jù)實(shí)時(shí)上傳云端。  

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）：通過多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式實(shí)現(xiàn)高特異性定量，結(jié)合同位素內(nèi)標(biāo)法（如棒曲霉素-13C7）校正基質(zhì)效應(yīng)，檢測(cè)限低至0.005μg/kg。  

電化學(xué)傳感器：基于便攜式電化學(xué)工作站構(gòu)建適體傳感器，利用催化電流變化定量玉米赤霉烯酮（ZEN），線性范圍0.01ng/mL-100ng/mL，檢測(cè)下限0.389pg/mL。  

儀器操作與質(zhì)量控制  

設(shè)備校準(zhǔn)與維護(hù)：定期校準(zhǔn)移液器、離心機(jī)、恒溫孵育器（如37℃±0.5℃），確保試劑有效期驗(yàn)證（如ELISA試劑盒需測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率）。  

質(zhì)量控制措施：  

內(nèi)部質(zhì)控：隨樣品檢測(cè)空白對(duì)照、高/中/低濃度標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)（回收率80%-120%）。  

外部驗(yàn)證：參與室間質(zhì)評(píng)或?qū)嶒?yàn)室比對(duì)，確保結(jié)果一致性（如Z-評(píng)分≤2）。  

誤差控制：避免過柱流速過快影響回收率，氮吹吹干時(shí)需精確控制體積，防止目標(biāo)物損失。  

結(jié)果分析與數(shù)據(jù)管理  

數(shù)據(jù)解讀：對(duì)比國家標(biāo)準(zhǔn)（如黃曲霉毒素B1限值5μg/kg），超標(biāo)樣品需復(fù)檢并溯源至原料批次。