葉酸檢測試劑盒流程使用與避坑指南

1.樣本采集與處理規范  

標本新鮮度：血清/血漿需在采集后2小時內分離，避免溶血（溶血會導致葉酸值虛高，因紅細胞含高濃度葉酸）和脂血（脂血會干擾檢測結果，需空腹12小時采血）。標本在2-8℃可穩定2天，-20℃可穩定1個月，但僅允許1次凍融，避免反復解凍導致葉酸降解。  

抗凝劑選擇：血漿樣本需使用EDTA或檸檬酸鈉抗凝，禁止使用肝素（可能抑制酶反應）；尿液、胸腹水等需離心取上清，細胞培養上清需通過反復凍融釋放細胞內葉酸。  

特殊處理要求：含生物素（>5mg/d）治療患者需停藥8小時后采血；避免使用疊氮鈉防腐（抑制HRP活性）；高劑量維生素C或亞葉酸可能干擾檢測，需提前告知實驗室。  

2.試劑保存與操作細節  

儲存條件：試劑盒需2-8℃保存，避免冷凍；底物A、B需避光保存，防止揮發或光解；標準品稀釋后不可儲存，需現配現用；不同批號試劑嚴禁混用，避免影響檢測線性。  

操作流程：試劑使用前需室溫平衡15-30分鐘；加樣時使用一次性吸頭，避免交叉污染；溫育時間（如37℃孵育）需嚴格計時，誤差≤5分鐘；洗滌時需充分拍干，避免殘留液影響顯色反應；顯色反應需避光進行，終止液加入后15分鐘內完成OD值讀取。  

儀器校準：酶標儀需定期校準波長（450nm）和光路，確保吸光度測量準確性；洗板機需驗證洗滌次數和體積，避免洗板導致背景值升高。  

3.結果解讀與質量控制  

參考范圍：成人血清葉酸正常范圍為3-20ng/mL（不同檢測方法差異大，需參考試劑盒說明書）；孕婦需關注紅細胞葉酸（≥340nmol/L）以評估長期儲備，血清葉酸僅反映短期攝入。  

干擾因素：溶血、脂血、黃疸可能干擾結果；氨基蝶呤、甲氨蝶呤等結構類似物可能與葉酸競爭結合，導致假陰性；高劑量生物素（>50ng/mL）可能抑制電化學發光反應。  

質量控制：每批檢測需包含校準品（至少6個濃度點）和質控品（高、中、低值）；結果需通過線性回歸（R²≥0.99）和重復性（CV≤10%）驗證；異常結果需復測或結合其他方法（如LC-MS/MS）確認。  

4.特殊場景與安全防護  

臨床應用：孕婦需在孕前3個月開始補充葉酸，檢測可評估補充效果；巨幼細胞性貧血患者需結合維生素B12檢測，避免誤診；腫瘤患者需監測葉酸水平，指導化療藥物（如甲氨蝶呤）劑量調整。  

安全操作：實驗人員需佩戴手套、口罩和護目鏡，避免接觸終止液和底物；廢棄物需按生物危害處理，防止環境污染；試劑盒過期的組分不可使用，需按說明書報廢。